Метиленовий блакитний. Лікування риби.

Метиленовий блакитний – органічний барвник катіонного типу, похідний фенотіазину. Має вигляд чорно-синіх кристалів чи темно-зеленого кристалічного порошку. Розчиняється у воді, хлороформі та частково розчиняється у спиртах. Завдяки інтенсивному забарвленню, його використовують для фарбування препаратів у мікроскопії та гістології. У вигляді спиртових розчинів застосовується як антисептичний лікарський засіб. Також як барвник входить до складу фарб.

Сфери застосування

Ветеринарія

• фунгіцид - служить антисептиком при інкубації ікри; максимальна гранично допустима норма залишку 10 мкг/кг
• 0,5 і 1 % розчини використовуються для зовнішнього, внутрішнього застосування, а також у вигляді ін’єкцій для лікування тварин та птиці

Барвник

• для фарбування шовку, деревини, паперу, шкіри, пластику та бавовни

Аналітична хімія

• застосовується для спектрофотометричного визначення хлоратів, перхлоратів, ПАР і деяких металів
• редокс індикатор – індикатор, чутливий до зміни рН та іонної сили розчину

Фармацевтика

• розчин еозину метиленового блакитного по Май-Грюнвальду використовується в клінічній медицині в якості барвника забарвлення формених елементів крові людини і забезпечує попереднє забарвлення і фіксацію препаратів крові
• як протиотрута при інтоксикаціях, зокрема солями ціанідної кислоти, чадним газом, сірководнем, нітритами, аніліном і його похідними
• у недавніх дослідженнях показав ефективність у зниженні нейродегенерації при таких станах як інсульт, церебральна ішемія, хвороба Паркінсона, черепно-мозкова травма
• в хірургії використовують для візуалізації біоплівок
• у фотодинамічній терапії (ФДГ) є напрямком в онкології
• вивчається як активний агент при сечових інфекціях, малярії, хворобі Альцгеймера й коронавірусі. Завдяки протизапальним, антиоксидантним і уросептичним властивостям метиленовий блакитний може застосований при лікуванні пацієнтів з гострими і рецидивуючими інфекціями сечової системи, у тому числі сечокам’яної хвороби, особливо при необхідності знизити рівень супутньої інфекції без антибіотиків, і може бути корисним для запобігання утворенню нових каменів
• у вигляді розчину для ін’єкцій (5 мг/мл), який повільно вводять у вену протягом п’яти хвилин використовується у дорослих і дітей будь-якого віку як антидот для лікування симптомів метгемоглобінемії, спричиненої застосуванням певних ліків або хімічних речовин

Лікування риби

МБ ефективний засіб для профілактики та лікування поверхневих грибкових та бактеріальних (Ichthyophthirius (Ich), Chilodonella і Costia) інфекцій ікри, малька та дорослої риби.

Рекомендовані пропорції – 1 чайна ложка метиленового блакитного на 100 літрів води. Вносити по всій поверхні водойми, а не точково.

Лікування тварин і птиці

Застосовують 0,5% і 1 % розчини для зовнішнього, внутрішнього застосування, а також у вигляді ін’єкцій для лікування тварин та птиці. Рекомендовані дози для внутрішнього застосування (0,5-1%) та для ін’єкцій (1%) становлять відповідно: коні та ВРХ – 200-600 мл і 100-200 мл; свині та МРХ – 50-160 мл і 20-50 мл; собаки – 10-30 мл і 5-10 мл.

Метиленовий блакитний в аналізі

•  Метод визначення вмісту аніонних поверхнево-активних речовин вимірюванням індексу метиленового блакитного (МБАР) (ДСТУ ISO 7875-1:2012)
•  Якість води. Визначення розчинених сульфідів. Фотометричний метод з використанням метиленового блакитного. (ДСТУ ISO 10530:2017 (ISO 10530:1992, IDT))
•  Методи випробувань геометричних характеристик заповнювачів. Частина 9. Оцінювання тонких фракцій. Метод з використанням метиленового блакитного (EN 933-9:2009+А1:2013,IDT) (ДСТУ Б EN 933-9:2015)

Метиленовий блакитний як індикатор

Нормальний окиснювальний потенціал, (Е0), В: +0,532 В для рН=0; +0,011 В для рН = 7. Забарвлення окисненої форми – синє, відновленої форми – безбарвне. Приготування розчину індикатору: 0,05 г препарату розчиняють у 100 см3 дистильованої води або 1 г препарату розчиняють під час нагрівання у 50 см3 етанолу з масовою часткою 96 %.

Метиленовий блакитний у складі змішаного індикатору для неводного титрування

Метиленовий блакитний і хінальдіновий червоний, розчинник нітрометанбензол. Перехід забарвлення від лужного до кислого середовища: пурпурне – синє – зелене. Приготування розчину індикатору: 0,1 г метиленового блакитного та 0,2 г хінальдінового червоного розчиняють у 100 см3 метилового спирту.

Екстракційно-фотометричне взначення аніонної ПАР додецилсульфату натрію з метиленовим блакитним

Метод ґрунтується на утворенні розчинних у хлороформі асоціатів аніонних ПАР з аналітичним реагентом метиленовим блакитним, які забарвлені у синій колір. Сам реагент у хлороформі не розчиняється. Метод дуже чутливий, молярний коефіцієнт світопоглинання 2,2∙103, дозволяє визначати вміст таніонних ПАР у водах на рівні ГДК.

Реагенти, посуд, прилади

• Метиленовий блакитний (МБ). Нейтральний розчин: розчиняють 0,35 г метиленового блакитного у 1 л дистильованої води. Кислий розчин: розчиняють 0,35 г метиленового блакитного у 0,5 л дистильованої води, додають 6,5 мл концентрованої сірчаної кислоти і розбавляєть водою до мітки.
• Фосфатний буферний розчин (рН 10)
• Хлороформ
• Розчини NaOH (1 та 0,01 моль/л)
• Розчин додецилсульфату натрію (ДДСН) (0,01 мг/мл)
• Мірні колби ємністю 50, 100 мл
• Мірні піпетки ємністю 1, 5, 10 мл
• Ділильні лійки ємністю 200-250 мл
• Спектрофотометр

Методика роботи

Для визначення ДДСН у розчині у ділильну лійку ємністю 200-250 мл вносять 100 мл досліджуваної води (попередньо сконцентрованої упарюванням, якщо у 100 мл міститься менше 20 мкг АПАР), додають 10 мл фосфатного буферу з рН 10, 5 мл нейтрального розчину МБ і 25 мл хлороформу. Струшують протягом 1 хв і витримують 1 хв до повного розшарування фаз. Зливають шар хлороформу в іншу ділильну лійку, в яку попередньо наливають 110 мл дистильованої води і 5 мл кислотного розчину МБ. Проводять екстракцію і фільтрують нижній хлороформний шар через насичений хлороформом ватний фільтр у мірну колбу ємністю 50 мл.
У першу лійку наливають ще 10 мл хлороформу і повторюють описані вище операції. Екстракцію повторюють порціями хлороформу 10 і 5 мл. Всього у мірній колбі повинно зібратись близько 40 мл хлороформного екстракту. Вміст колби доводять до мітки хлороформом, перемішують, і вимірюють світопоглинання фільтрату при λ=650 нм у кюветах товщиною 3 см по відношенню до хлороформу, отриманого при проведенні через весь аналіз 100 мл дистильованої води.

Побудова калібрувального графіка

У 7 мірних колб ємністю 100 мл вносять 0, 2, 5, 10, 15, 20, 30 мл розчину ДДСН з концентрацією 0,01 мг/мл і розводять дистильованою водою до мітки. Кожний розчин переносять у ділильні лійки, обробляють так, як і досліджувані проби, та вимірюють оптичні густини отриманих хлороформних екстрактів.
Будують калібрувальний графік у координатах «оптична густина – вміст ДДСН». Проводять статистичну обробку результатів аналізу: обчислюють стандартне відхилення та довірчий інтервал.

Приготування розчину барвника метиленового блакитного для біохімічного аналізу

6 г метиленового блакитного розчиняють у 100 мл 96 % етанолу. Наважку барвника висипають у склянку з темного скла, заливають спиртом і ставлять у термостат при температурі 37 °С на 18 - 24 год, періодично струшуючи розчин. За цей час більша частина метиленового блакитного розчиняється, на дні склянки залишається невеликий осад, що свідчить про насичення розчину. На основі насичених розчинів готують водні розчини фарб на дистильованій воді, використовуючи барвники у співвідношенні: 1:100; 1:1000 (для прижиттєвих препаратів та методу Шардакова, для виявлення виділення О2 при фотосинтезі) або 1:10; 1:40 (для постійних препаратів).

Питання-відповідь

Питання: Як лікувати аеромоноз (краснуха коропів, геморагічна септицемія, інфекційна черевна водянка, люблінська хвороба) коропів та іншої риби?

Відповідь: Якщо немає можливості лікувати хворих риб у карантині, метиленовий блакитний вводять у водойму водним розчином або з кормом.

Спосіб 1. 1 г метиленового блакитного на 10 квадратних метрів ставу. Розраховану кількість порошку метиленового блакитного треба розчинити у невеликій кількості чистої перекип'яченої води. Це може бути 1 л. Потім водою доводять до об'єму, зручного для рівмонірного розпреділення по водоймі. Розливати лікувальний розчин треба у різних точках поверхні, щоб уникнути сконцентрування препарату в одному місці. Це особливо важливо у водоймах з низькою швидкості течії.

За необхідності операцію проводять повторно через 10-14 днів.

Спосіб 2. 1 г метиленового блакитного на 1 кг корму. Можна замочити корм у водному розчині з розрахованою концентрацією метиленового блакитного, або ж порошок метиленового блакитного рівновірно розмішати з кормом. Годують рибу таким кормом раз у 3-4 дні. Зазвичай період лікування триває більше двох тижнів.